01.简介

特异性识别(bie)双链DNA中酶切位(wei)点，将构建好的质粒酶切并处(chu)理成线性化双链DNA模(mo)板，用(yong)于下(xia)一(yi)步mRNA合(he)成。

01.简介

以(yi)(yi)(yi)DNA为模(mo)板，在体(ti)外(wai)以(yi)(yi)(yi)RNA聚(ju)合(he)(he)(he)酶(mei)催化合(he)(he)(he)成(cheng)(cheng)mRNA。 体(ti)外(wai)转录mRNA的(de)关键酶(mei)T7 RNA聚(ju)合(he)(he)(he)酶(mei)，是高度(du)特异(yi)识别T7启(qi)动(dong)子序(xu)(xu)列的(de)DNA依赖(lai)的(de)5'→3' RNA聚(ju)合(he)(he)(he)酶(mei)，以(yi)(yi)(yi)含(han)有T7启(qi)动(dong)子序(xu)(xu)列的(de)单链或双链DNA为模(mo)板、以(yi)(yi)(yi)核苷酸（NTP）为底物(wu)，合(he)(he)(he)成(cheng)(cheng)并启(qi)动(dong)下游(you)的(de)单链DNA互补的(de)RNA合(he)(he)(he)成(cheng)(cheng)。

01.简介

 在RNA合成(cheng)(cheng)过(guo)(guo)程(cheng)中加(jia)入无机(ji)焦(jiao)磷酸(suan)(suan)酶，用(yong)于增加(jia)RNA产(chan)量(liang)。 无机(ji)焦(jiao)磷酸(suan)(suan)酶通过(guo)(guo)催化(hua)无机(ji)焦(jiao)磷酸(suan)(suan)盐水(shui)解(jie)生成(cheng)(cheng)正磷酸(suan)(suan)盐，可去除无机(ji)焦(jiao)磷酸(suan)(suan)盐对反(fan)应体(ti)系的(de)抑制，同时为反(fan)应提(ti)供热力学(xue)动力，从而促进产(chan)物的(de)生成(cheng)(cheng)。作为一种良好的(de)辅剂(ji)，常用(yong)于RNA、DNA、蛋白质的(de)生物合成(cheng)(cheng)中。同样用(yong)于mRNA疫(yi)苗体(ti)外大规(gui)模合成(cheng)(cheng)中，可提(ti)高mRNA产(chan)量(liang)。

01.简介

在 RNA合成结束后，去除模(mo)板(ban)DNA。 DNA酶I是一种(zhong)可消(xiao)化单(dan)链(lian)或(huo)双链(lian)DNA产生(sheng)单(dan)脱氧(yang)核(he)(he)苷酸或(huo)单(dan)链(lian)或(huo)双链(lian)的寡脱氧(yang)核(he)(he)苷酸的脱氧(yang)核(he)(he)糖核(he)(he)酸内切(qie)酶。它识别并(bing)切(qie)割磷酸二酯键，产生(sheng)5'端为(wei)磷酸基团，3'端为(wei)羟基单(dan)脱氧(yang)核(he)(he)苷酸和寡脱氧(yang)核(he)(he)苷酸。

01.简介

 在 mRNA合(he)成与修(xiu)饰中加(jia)入RNA酶抑(yi)制(zhi)剂，防止RNA降解(jie)。 RNA酶抑(yi)制(zhi)剂可与RNA酶抑(yi)A形成1：1复合(he)体(ti)，能极强抑(yi)制(zhi)RNA酶，保护(hu)mRNA转录后不被降解(jie)

01.简介

在mRNA的(de)(de)5'端加(jia)上Cap 0帽结(jie)构(gou)，再将Cap 0转化为Cap 1结(jie)构(gou)。 在真核生(sheng)物中，转录后的(de)(de)mRNA需要经过(guo)加(jia)帽加(jia)尾修饰(shi)，才能形(xing)成(cheng)完(wan)整的(de)(de)结(jie)构(gou)，即在5'端形(xing)成(cheng)一(yi)个帽子结(jie)构(gou)（Cap 1），3’端形(xing)成(cheng)Poly A尾结(jie)构(gou)。这一(yi)系列(lie)的(de)(de)修饰(shi)有助于(yu)mRNA的(de)(de)稳定(ding)、转运(yun)和(he)翻译。

 牛痘病毒加帽酶通过给转录合(he)成的mRNA催化(hua)加上帽子结构（Cap 0），极大提高了mRNA的稳定性和翻译能力，使mRNA可在(zai)细(xi)胞(bao)内表达蛋白，从而避免(mian)核酸外(wai)切酶等的降解破坏(huai)。 Cap 0进一步(bu)形成cap 1结构需要(yao)2’-O甲基转移酶（SAN2022-04）参(can)与，该修(xiu)饰可以降低RNA在(zai)体内引起(qi)的细(xi)胞(bao)先天免(mian)疫反(fan)应。

01.简介

在(zai)mRNA的5'端加(jia)上Cap 0帽结(jie)(jie)(jie)(jie)构(gou)，再将Cap 0转(zhuan)化为Cap 1结(jie)(jie)(jie)(jie)构(gou)。 Cap 1结(jie)(jie)(jie)(jie)构(gou)存在(zai)于所有真核生(sheng)物mRNA，有助于稳定mRNA结(jie)(jie)(jie)(jie)构(gou)和提(ti)高翻译效率(lv)。研究表明(ming)，体外(wai)转(zhuan)录修饰得(de)到的Cap 1结(jie)(jie)(jie)(jie)构(gou)mRNA更(geng)不容易被免(mian)疫系统(tong)的RNA感受器（RIG-I）识(shi)别，因此在(zai)体内引起的细胞(bao)先天免(mian)疫反应更(geng)低。

01.简介

在(zai)mRNA的3'端加上Poly A尾(wei)。

Poly A 尾(wei)(wei)结(jie)构与mRNA的稳定、转运和翻(fan)译(yi)密切相关(guan)。在(zai)(zai)体外转录(lu)mRNA过(guo)程中， Poly A加(jia)尾(wei)(wei)酶不依赖模板的存在(zai)(zai)，可以高效催化 ATP 以 AMP 的形式依次(ci)掺入到 RNA 的 3´末(mo)端，即在(zai)(zai) RNA 的 3´末(mo)端加(jia)多聚 A 尾(wei)(wei)，最大(da)程度(du)还原体内(nei)加(jia)尾(wei)(wei)过(guo)程。